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化瘀消癥颗粒对低氧状态下滋养细胞增殖、黏附与自噬的影响

袁烁  张家旗  王宣尹  邓高丕  
【摘要】:目的探讨化瘀消癥颗粒治疗输卵管妊娠的可能作用机制。方法人源妊娠滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞消化计数后接种至96孔板,分别设空白组、低氧组和化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组,每组3个复孔。低氧组和化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组每孔加入含400μmol/L二氯化钴(Co Cl2) 0.1 ml作用24 h建立低氧模型。造模后化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组在培养液中分别加入20 mg/ml化瘀消癥颗粒母液50、100、150μl分别作用24 h、48 h、72 h后,采用CCK8法筛选后续实验药物干预时间。采用同上分组及干预方法,根据CCK8检测结果确定作用时间,采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况并计算细胞迁移率,采用Western-blot法检测细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)与自噬标志蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3蛋白Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达。结果根据CCK8法检测结果确定作用时间为48 h继续后续实验。与空白组比较,低氧组细胞迁移率升高,HIF-1α、N-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量均升高,E-cadherin蛋白相对表达量降低(P0.05)。与低氧组比较,化瘀消癥颗粒低、中、高剂量组细胞迁移率降低,HIF-1α、N-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量降低,且呈浓度依赖性(P0.05);化瘀消癥颗粒高、低剂量组E-cadherin蛋白相对表达量升高,且化瘀消癥颗粒高剂量组升高更显著(P0.05)。结论化瘀消癥颗粒可能通过抑制低氧所导致的滋养细胞的增殖、黏附、自噬活性,而发挥治疗输卵管妊娠的作用,以高剂量效果更佳。

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