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脊髓康通过IRE1-XBP1通路抑制内质网应激诱导的PC12细胞凋亡

涂鹏程  郭杨  马勇  王磊  黄桂成  吴承杰  潘娅岚  
【摘要】:目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康(JSK)抑制内质网应激(ERS)诱导的PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞为神经元样细胞并通过流式细胞技术鉴定;诱导后细胞分为空白组(无干预措施)、模型组[2μmol/L毒胡萝卜素(TG)]、脊髓康组(2μmol/L TG及0.0521 g/mL JSK水提物冻干粉,合生药0.625 g/mL);CCK8法检测各组细胞24、48、72 h增殖活性,流式细胞技术检测各组细胞凋亡状态,Western Blot与q-PCR检测1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、X盒结合蛋白1(XBP1)、葡萄糖调节蛋白78(Grp78)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白及mRNA表达情况,透射电镜扫描各组细胞观察细胞及内质网形态学特征。结果与空白组比较,模型组NGF诱导的神经元样PC12细胞增殖活性显著降低(P0.05),晚期凋亡明显增高(P0.01),电镜扫描显示其细胞粗面内质网结构肿胀,囊泡化,呈典型的细胞凋亡形态;Grp78、CHOP蛋白表达显著升高(P0.05),XBP1及IRE1蛋白表达也有微微上调,但差异无统计学意义(P0.05);Grp78、CHOP、XBP1及IRE1 mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,JSK组24、48、72 h PC12细胞增殖活性升高(P0.05),晚期凋亡及早期凋亡均明显降低(P0.05,P0.01);Grp78、CHOP的蛋白及mRNA表达均降低(P0.05),XBP1及IRE1蛋白及mRNA表达明显上调(P0.05)。透射电镜观察JSK组内质网结构仍存在,存在完整的外膜,内质网膜破损较轻,可见部分凋亡形态学改变。结论 JSK可能通过活化IRE1-XBP1途径改善TG诱导的内质网应激状态,从而抑制ERS导致的神经元样PC12细胞凋亡,这可能是其有效改善脊髓损伤后神经元功能修复的机制。

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