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AKT通过C-myc通路调控肝癌HepG2细胞中PTEN蛋白的表达

郭春华  张雅雅  刘蕾  万幼峰  
【摘要】:目的:探讨C-myc是否参与肝肿瘤HepG2细胞内蛋白激酶B (protein kinase B,PKB,又称AKT)对第10号染色体同源丢失性磷酸酶基因和张力蛋白(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)表达的调控。方法:HepG2细胞经不同浓度的AKT抑制剂Capivasertib (5、10及20nmol/L)处理后,采用蛋白质印迹法检测AKT、C-myc和Bad及其磷酸化蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR法检测对C-myc下游真核细胞翻译起始因子4E (eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)、支链氨基酸氨基转移酉每1 (branched-chain amino acid aminotransferase 1,BCAT1)及WW结构域E3泛素连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1,WWP1)基因转录活性的影响。采用siRNA法沉默HepG2细胞中eIF-4E、BCAT1及WWP1基因的表达,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测沉默eIF-4E、BCAT1及WWP1基因表达对PTEN转录和蛋白表达水平的影响;细胞荧光免疫法检测Capivasertib或沉默WWP1基因表达对PTEN在HepG-2细胞中表达和定位的影响。结果:HepG2细胞经不同浓度的Capivasertib处理8 h后,磷酸化-AKT(phospho-AKT,p-AKT)、p-C-myc和p-Bad蛋白的表达水平均较对照组明显下调(P值均0.01),C-myc调控的下游基因eIF-4E、BCAT1及WWP1 mRNA的表达水平均明显下调(P值均0.01)。沉默eIF-4E、BCAT1及WWP1基因表达,对PTEN mRNA的表达均没有明显影响(P值均 0.05),但沉默WWP1基因表达可使PTEN蛋白的表达水平明显上调(P0.01)。细胞荧光免疫实验进一步证实,沉默WWP1基因表达与Capivasertib作用均可增强PTEN在HepG2细胞中的表达水平并使其在细胞膜上聚集。结论:AKT能通过C-myc信号途径影响WWP1基因的转录水平,进而实现对HepG2细胞中PTEN表达的调控。

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