乙型肝炎病毒DNA聚合酶中核糖核酸酶RNase H反式调节基因DNAPTP4的克隆化研究

【摘要】：目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)核糖核酸酶RNaseH蛋白反式激活基因差异表达的cDNA,克隆RNaseH反式激活相关靶基因。方法以RNaseH表达质粒pcDNA31(-)RNaseH转染HepG2细胞,以空载体pcDNA31(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析,其未知基因片段通过Kozak规则和多聚腺苷酸信号序列,初步确定。以逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实。结果该新基因被命名为DNAPTP4,在GenBank中注册,注册号为AY450392。DNAPTP4基因的编码序列全长为828个核苷酸(nt),编码产物由276个氨基酸残基(aa)组成。结论应用SSH技术成功筛选与克隆RNaseH反式激活新型靶基因DNAPTP4,为进一步阐明RNaseH反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法。

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2	侯长余,赵丹玉;蛙卵核糖核酸酶的抗肿瘤研究[J];锦州医学院学报;2003年03期
3	付勇,刘彦仿,杨守京,赵君,李锴男;牛蛙核糖核酸酶在大肠杆菌中的高效表达及其初步纯化[J];肿瘤研究与临床;2004年04期
4	张国庆;RNA分析中的核糖核酸酶控制[J];现代预防医学;2004年02期
5	陈国凤,王琳,成军,张健,刘妍,刘敏,张玲霞,李莉;基因表达谱芯片技术筛选HBV DNA多聚酶RNase H反式调节基因[J];中西医结合肝病杂志;2005年02期
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8	袁振铎 ,狄华 ,任淑卿;内毒素对家兔血清RNase影响的研究[J];基础医学与临床;1986年05期
9	;卵巢恶性肿瘤患者血清核糖核酸酶测定[J];华中科技大学学报(医学版);1991年03期
10	赵勇,蔡方,陈松旺;核糖核酸酶含量测定作为乳腺肿瘤标志物的探索[J];中国肿瘤临床;1994年08期
11	刘庆辉，刘德培，梁植权;用RNase保护试验检测珠蛋白基因表达[J];生物化学与生物物理进展;1994年04期
12	刘晨,赵三纯;核糖核酸酶在宫内发育迟缓中活性水平及临床意义[J];中国生育健康杂志;1998年01期
13	孙芝琳,李光志,孙泽芳;癌症患者血清核糖核酸酶活性变化的初步观察[J];四川大学学报(医学版);1983年03期
14	陈苏民,Donald L.Cort;大肠杆菌中rnc与era基因的共表达[J];中国生物化学与分子生物学报;1991年05期
15	付勇,刘彦仿,苏勤,赵君,张静梅;牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达[J];医学研究生学报;2004年01期
16	张小林;韩丽君;李龙;林志雄;;RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳的优化及探讨[J];现代生物医学进展;2011年02期
17	王道苑,许帼英,郑集;核糖核酸酶抑制因子与衰老关系的研究[J];中国生物化学与分子生物学报;1986年04期
18	高玉民,朴英杰,胡雯,周翼模;RNA酶(RNase)-胶体金法显示艾氏腹水癌细胞RNA的分布[J];第一军医大学学报;1991年04期
19	帅晓明;反义寡核苷酸作用机制研究进展[J];国外医学.分子生物学分册;2001年04期
20	邹爱民,高萍,林芳,张利朝,张惠中;重组人乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因工程菌发酵条件的初步研究[J];中国生化药物杂志;2005年02期

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1	;“A Life or Death Decision”:Molecular Control of RNase-Based Self-Incompatibility in Flowering Plants[A];植物分子生物学与现代农业——全国植物生物学研讨会论文摘要集[C];2010年
2	;Cellular Control of S-RNase-Based Self-Incompatibility in Flowering Plants[A];2011全国植物生物学研讨会论文集[C];2011年
3	乌云塔娜;刘学英;;中国梨S-RNase基因启动子的TAIL-PCR克隆及功能预测[A];梨科研与生产进展（五）[C];2011年
4	徐义流;张绍铃;;离体条件下梨花柱S-RNase降解花粉管RNA特性研究[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
5	徐国华;张绍铃;陈迪新;徐义流;;离体条件下梨雌蕊RNase对花粉胞内游离钙离子浓度变化的影响[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
6	成军;夏小兵;王刚;刘妍;钟彦伟;王琳;杨继珍;;杜氏利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆化与序列分析[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
7	;Molecular control of S-RNase-based self-incompatibility in flowering plants[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年
8	李绵洋;刘源;傅淑宏;彭文红;丛玉隆;;慢性髓细胞白血病相关蛋白CMLAP的基因克隆化研究[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
9	吴丽萍;吴祖建;林奇英;谢联辉;;一种食用菌提取物y3对烟草花叶病毒的钝化作用及其机制[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
10	Katherine G.Hamil;Frank S.French;Susan H.Hall;;Cloning and characterization of novel epididymal Specific genes in Primates[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

中国博士学位论文全文数据库

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6	杜喜玲;水稻和玉米组织特异表达基因的克隆及功能分析[D];复旦大学;2004年
7	王鸿霞;樱桃自交不亲和性在遗传育种中的研究及应用[D];山东农业大学;2003年
8	陈晓流;樱桃S基因型及自交（不）亲和机制研究[D];山东农业大学;2003年
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10	周建涛;外源钙调素对梨自交不亲和性花粉管钙信号的调控作用[D];南京农业大学;2009年

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2	陈浩军;大肠杆菌来源核酶RNase P催化亚单位对人巨细胞病毒DNA聚合酶mRNA片段体外切割的研究[D];暨南大学;2003年
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5	魏亮;应用RNAi技术抑制哺乳动物乙酰化酶p300基因的表达[D];东北师范大学;2005年
6	濮海平;免疫调节细胞因子白介素-10基因克隆化及原核重组白介素-10蛋白的制备[D];青岛大学;2004年
7	江南;梨S基因芯片的试制及分子杂交条件的初步研究[D];中南林业科技大学;2007年
8	毕方铖;中国白梨15个主栽品种S基因型及S_（29）-RNase基因的鉴定[D];中南林学院;2004年
9	刘妍;丙型肝炎病毒非结构蛋白4A、4B与肝细胞相互作用的机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
10	赵鹏;核糖核酸酶抑制因子基因修饰对其功能的影响[D];大连医科大学;2004年

中国重要报纸全文数据库

前5条

1	张晔　胡必强;我科学家找出抑制梨“近亲繁殖”的原因[N];中国食品质量报;2008年
2	庄愉;英雄本色渐显[N];医药经济报;2002年
3	记者毛磊;86年前，一场流感夺去2000多万生命[N];新华每日电讯;2004年
4	余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
5	记者张晔　通讯员胡必强;我科学家找出抑制梨“近亲繁殖”的原因[N];科技日报;2008年

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