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牛β-酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆

刘松财  张玉静  欧阳红生  张永亮  刘万臣  黎诚耀  赵建军  金扩世  汪玉松  
【摘要】:采用蛋白酶K法从母牛肝中提取染色体DNA,将其纯化后作为PCR扩增模板。以引物设计软件从牛β-酪蛋白基因上游600bp至第1个外显子设计引物,引物长度19nt,跨度637bp。扩增产物电泳结果显示,在分子量Marker657bp带附近,出现一明显亮带,这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化PCR产物,煮沸裂解法提取载体pBluescriptⅡKs+质粒,EcoRV酶切质粒DNA,T4DNA连接酶连接PCR扩增片段和质粒DNA。将重组质粒DNA转化到JM101大肠杆菌中,经筛选、酶切、测序鉴定,结果表明所克隆的片段为牛β-酪蛋白基因上游调控序列。

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