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仔猪肺、肠组织离体感染模型的建立及应用

黄石磊  谢录异  余秋寒  冉玲  杨洋  王凯  宋振辉  
【摘要】:目前,病毒的研究多局限于细胞水平,精密组织切片(Precision-cut tissue slices,PCTS)与细胞水平相比不仅能够比较完整的保存正常组织结构、细胞间的联系及细胞极性,而且也能保证切片的生存能力,使其能够最大限度地模拟在体状态,为病毒的深入研究带来福音。本研究通过制备仔猪肺、肠的离体感染模型,并对离体模型的可行性进行验证,采用ATP检测试剂盒验证切片活性,并对其感染猪流行腹泻病毒(porcine epidemic diahorrea virus,PEDV) CV777和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)GFP,进行RT-PCR检测和免疫荧光分析,结果显示小肠精密切片活性较好,维持在48 h左右,且能成功感染PEDV CV777和TGEV GFP,通过将肺脏气道内填充1.5%的低熔点琼脂糖,然后转移至切片机制作仔猪肺精密切片,观察气道上皮细胞纤毛活力,同时感染猪呼吸道冠状病毒(porcine respiratory coronavirus,PRCoV)后,进行RT-PCR检测和免疫荧光分析,结果显示肺精密切片生存力能够维持5 d左右,PRCoV成功感染肺精密切片且分布于气道上皮细胞周围,且病毒感染组纤毛活力比正常组下降快,结果表明,肺切片纤毛活性可作为病毒感染的重要评价指标。该研究可为模拟体内感染试验的离体模型提供理论依据,也为防制PEDV、TGEV、PRCoV提供新方法。

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