葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠TLR4/IKKβ/NF-κB信号通路的影响

【摘要】：目的:观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机血糖≥13.9 mmoL·L~(-1),为成模小鼠44只。随机分为5组,每组11只。正常组(生理盐水20 mL·kg~(-1))、阿卡波糖组(3.9 mg·kg~(-1))、葛根芩连汤高、低剂量组(1.82、0.45 g·kg~(-1))及模型组(生理盐水20 mL·kg~(-1)),连续灌胃给药8周,1次/d,系统评价血糖及体质量。末次给药12 h后,摘眼球取血,提取血清及肌肉、肝脏组织。采用半定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及葡萄糖转运子4(GluT4)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肌肉组织IκB磷酸化激酶β(IKKβ)蛋白、核转录因子-κB(NF-κB)及肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组体质量及血糖显著升高(P0.01);与模型组比较,阿卡波糖组及葛根芩连汤组能够明显降低体质量及血糖水平(P0.05,P0.01)。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α、IL-6含量显著升高(P0.01),GluT4含量明显下降(P0.05);与模型组比较,各给药组炎性因子TNF-α、IL-6含量均有不同程度下降(P0.05,P0.01),阿卡波糖组与葛根芩连汤高剂量组GluT4含量明显升高(P0.05,P0.01)。Western blot分析显示,与正常组比较,模型组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均有升高(P0.01);与模型组比较,阿卡波糖组与葛根芩连汤组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均明显下降(P0.05,P0.01)。结论:葛根芩连汤可能在调节肠道菌群的基础上,通过下调TLR4通路中关键炎性因子的水平,抑制其激活,提高GluT4的转位及活性水平,从而在一定程度上抑制炎性级联效应,改善2型糖尿病。