收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

中华绒螯蟹和罗氏沼虾cyclin B蛋白的原核表达、抗体制备及其鉴定

冯海洋  邱高峰  
【摘要】:从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)和罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)卵巢cDNA中克隆了cyclin B基因的开放阅读框,分别连接到pGEX-2T和pET-32a表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白GST-EsCB和Trx-MrCB。通过优化培养温度、IPTG浓度以及诱导时间,得出重组蛋白的最佳表达条件分别为:0.1 mmol/L IPTG、37℃、4 h和0.1 mmol/L IPTG、30℃、6 h。重组蛋白主要以包涵体形式存在。亲和层析纯化重组蛋白,作为抗原免疫家兔,制备GST-EsCB和Trx-MrCB多克隆抗体。ELISA检测抗体效价均高达1∶80 000,Western blot鉴定该抗体能特异性识别重组蛋白,而且均能够从卵巢总蛋白中检测到cyclin B蛋白。在中华绒螯蟹未成熟卵巢中cyclin B蛋白出现2种亚型,在罗氏沼虾未成熟卵巢中只有1种亚型,推测虾和蟹cyclin B蛋白调控卵母细胞成熟的分子机制不同。本研究制备了cyclin B抗体,旨为在蛋白水平研究cyclin B在卵母细胞成熟过程中的作用机制提供基础条件。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;国内主要水产品市场价格[J];科学养鱼;2011年08期
2 ;渔业新品种:罗氏沼虾“南太湖2号”[J];农民科技培训;2011年09期
3 向智龙;卓建华;程振涛;欧德渊;鲜思美;尹传宝;黄璐;禾彩红;;贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建[J];中国畜牧兽医;2011年07期
4 崔莉;朱战波;朱洪伟;崔玉东;朴范泽;;金黄色葡萄球菌isdB基因克隆、表达及其抗原性鉴定[J];河北科技师范学院学报;2011年01期
5 王悦如;李二超;龙丽娜;禹娜;张凤英;陈立侨;;中华绒螯蟹对盐度变化的适应及其渗透压调节的研究进展[J];海洋渔业;2011年03期
6 曹永军;;南美白对虾池套养罗氏沼虾技术[J];渔业致富指南;2011年16期
7 王晓梅;李晓东;王茜;靳婷婷;;中华绒螯蟹与合浦绒螯蟹线粒体细胞色素b基因片段的DGGE分析(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年06期
8 姜珊;刘梅;王宝杰;蒋克勇;王雷;;大肠杆菌表达抗脂多糖因子的发酵条件优化[J];中国农业科技导报;2011年04期
9 王玥;李义;孙汉;郭明凯;俞泉宇;;牛乳铁蛋白对中华绒螯蟹免疫功能的影响[J];粮食与饲料工业;2011年06期
10 马国达;王茜;于力;;Sf9细胞PHB2蛋白的原核表达及其抗血清的制备[J];中国预防兽医学报;2011年07期
11 李全;;乙醇对罗氏沼虾麻醉效果及虾肉品质的影响[J];黑龙江水产;2011年04期
12 李旭光;周刚;张彤晴;周军;林海;戚剑锋;方根生;;不同饵料饲喂对中华绒螯蟹一般营养成分的影响[J];江苏农业科学;2011年04期
13 王宇;;关于湖南省河蟹产业发展的思考[J];当代水产;2011年07期
14 王健华;林湛松;张雨良;杨文君;余乃通;刘志昕;;香蕉条斑病毒云南分离物ORFⅠ的原核表达及其抗血清制备[J];热带作物学报;2011年07期
15 严孝金;李锋;秦立廷;李倩倩;韩翠晓;冯舵;王笑梅;高伟;;传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究[J];安徽农业科学;2011年17期
16 张冬琳;杜丽;成鹰;刘涛;雷明;满初日嘎;王凤阳;;海南黄牛Cdc42 cDNA的克隆、表达及鉴定[J];中国畜牧兽医;2011年06期
17 杨宇;韦传宝;华俊雅;刘春云;吴琪瑶;;大蒜A病毒CP基因的原核表达及抗血清制备[J];生物技术通报;2011年07期
18 王洋;余源;王卫亮;陈阳;慈雅丽;田喜凤;郑佳;杨志宏;;蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的原核表达及纯化[J];中国人兽共患病学报;2011年06期
19 张伯文;孙龙生;姜亮;赵海涛;封克;张雪辰;;蚯蚓粉替代鱼粉对罗氏沼虾生长性能的影响[J];中国饲料;2011年15期
20 罗金水;吴祖建;谢联辉;;齿兰环斑病毒CP基因的原核表达及其产物抗血清制备[J];中国农学通报;2011年19期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张金彪;杨筱珍;成永旭;范朋;吴旭干;王春;杨志刚;赵柳兰;梁攀;洪宇航;杨丽丽;;饲料中添加不同生物胺对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)生长的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
2 蒋科技;张丹;皮妍;张凤英;孙曼曼;于忠利;乔振国;马凌波;;青蟹、梭子蟹、中华绒螯蟹三种经济蟹类可食部分的氨基酸、脂肪酸、重金属含量分析[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 邵路畅;王春;吴旭干;杨志刚;杨筱珍;成永旭;;一种配合饲料和天然饵料对中华绒螯蟹育肥品质的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 王悦如;李二超;陈立侨;;急性盐度胁迫对中华绒螯蟹雄蟹组织中部分生理、生化指标的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 孙晓;侯聪聪;杨万喜;;肌球蛋白Myosin Va参与中华绒螯蟹精子形成过程中顶体发生和细胞核形态建成[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
6 熊青海;陈婷;郭建英;唐建清;黄成;;不同生境下克氏原螯虾与中华绒螯蟹竞争研究[A];第三届全国生物入侵大会论文摘要集——“全球变化与生物入侵”[C];2010年
7 王群;赵云龙;马强;丁银娣;陈立侨;;微量元素锌对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)雄性生殖的影响[A];甲壳动物学分会成立20周年暨刘瑞玉院士从事海洋科教工作55周年学术研讨会论文(摘要)集[C];2002年
8 黄晓荣;庄平;章龙珍;屈亮;姚志峰;刘婷;冯广朋;刘鉴毅;;中华绒螯蟹胚胎发育及几种代谢酶活性变化的研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
9 于可明;侯林;;C-末端驱动蛋白KIFC1在中华绒螯蟹精子顶体形成过程中作用的分子机制[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
10 熊青海;陈婷;郭建英;黄成;;三种生境下克氏原螯虾与中华绒螯蟹竞争研究[A];第三届全国生物入侵大会论文摘要集——“全球变化与生物入侵”[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邱仁杰;脂肪酸营养对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)免疫及耐低氧能力的影响[D];上海海洋大学;2011年
2 钱冬;罗氏沼虾Nodavirus的分离、致病性与检测技术研究[D];浙江大学;2006年
3 刘立鹤;中华绒螯蟹雌体脂质营养及生殖调控研究[D];华东师范大学;2005年
4 孙红英;中华绒螯蟹线粒体基因组与16S rDNA遗传标记研究[D];南京师范大学;2002年
5 马长艳;中华绒螯蟹卵巢发育相关基因的研究[D];南京师范大学;2003年
6 徐海圣;中华绒螯蟹常见病原的分离鉴定、致病及免疫机制研究[D];浙江大学;2004年
7 马文明;罗氏沼虾雄性生殖系统特异性蛋白(TAP)的分子特征和生理功能研究[D];浙江大学;2010年
8 刘军;罗氏沼虾两种不同的热休克蛋白70分子生物学特征和功能[D];浙江大学;2005年
9 危少华;人重组IL-24基因治疗乳腺癌的实验研究[D];苏州大学;2005年
10 曹俊霞;罗氏沼虾雄性生殖系统特异性分子机制[D];浙江大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘晓明;胸腺肽α1-干扰素α2b融合基因克隆表达及产物活性分析[D];吉林大学;2007年
2 孟文丽;江浙短尾蝮蛇纤溶酶原激活剂的原核表达、纯化及其鉴定[D];福建医科大学;2008年
3 樊可;重组人巨细胞病毒基因在大肠杆菌中的表达[D];大连理工大学;2011年
4 王莉;克隆与表达草鱼干扰素基因及其抗弹状病毒效果的研究[D];中国农业大学;2005年
5 王英南;人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达和应用[D];青岛大学;2005年
6 张苗;家蚕SCI-SB基因克隆及其原核表达的研究[D];浙江大学;2005年
7 周丹;猪细小病毒SC1株VP2基因表达载体的构建及其表达的研究[D];四川农业大学;2005年
8 郝炜;中国葡萄属野生种抗白粉病基因原核表达与抗体制备[D];西北农林科技大学;2005年
9 郭志刚;鸡白细胞介素2基因与鸡毒支原体H3株TM-1基因的串联及原核表达[D];内蒙古农业大学;2006年
10 刘英丽;猪囊尾蚴cYI基因重组子的建立及表达[D];河北医科大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 黄克玲;罗氏沼虾可能延续去年牛市[N];江苏农业科技报;2011年
2 周燕芬;雨后罗氏沼虾池蓝藻多、虾“游塘”的处理[N];江苏农业科技报;2011年
3 阿米娜 阿尔法特;沙雅中华绒螯蟹热销区内外[N];新疆日报(汉);2011年
4 ;如何预防罗氏沼虾性早熟[N];江苏科技报;2001年
5 朱在春 陆业斌;可产罗氏沼虾虾苗25亿尾[N];扬州日报;2009年
6 王军毅;“南太湖2号”罗氏沼虾生长率提高36%[N];中国渔业报;2011年
7 张效新;用网箱养罗氏沼虾[N];江苏科技报;2004年
8 茆实 陈富权 陈林祥 吴元杰;罗氏沼虾之乡———高邮[N];新华日报;2004年
9 韩振冲 陈卫阳 周启生;我省罗氏沼虾重返欧洲[N];江苏经济报;2004年
10 吴正东;罗氏沼虾成虾养殖技术[N];云南科技报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978