在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白

【摘要】：目的表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV—1）衣壳蛋白p24，为制备抗p24单克隆抗体及其诊断杭原奠定基础。方法将编码HIV—1p24蛋白的P24(gag)基因片段，克隆到原核表达载体PET—17b的T7噬菌体启动子下游，构建重组表达质粒;转化大肠杆菌BL2（DE3），IPTG诱导表达，表达产物以SDS-PAGE、Westernblotting及点免疫印迹分析。结果构建成功重组表达质粒pET24，经IPG诱导，p24(gag)基因片段在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达，产物为30kDa的810—p24融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的38.4％;重组p24蛋白均与抗p24单克隆抗体及HIV—1阳性血清发生特异性反应。结论重组P24蛋白具有较好的免疫活性，是制备抗P24单克隆抗体及诊断试剂的理想抗原。