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超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用鉴定椴树蜂蜜中的抗氧化活性肽

谢博  傅红  杨方  
【摘要】:应用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用法(UPLC-Q-Exactive)鉴定椴树蜂蜜蛋白经胰蛋白酶水解后获得的肽类物质的组成和结构,并探讨椴树蜂蜜酶解多肽与其抗氧化活性的关系。椴树蜂蜜经三氯乙酸溶液沉淀,所得蛋白用胰蛋白酶酶解,酶解肽段经C18固相萃取柱富集净化后,采用0.1%甲酸(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,以高分辨质谱(Q-Exactive)的Full MS/ddMS~2模式对其进行鉴定。采用MaxQuant软件分析质谱结果,所得肽段在Uniprot上进行Blast序列对比,共鉴定出52种椴树蜂蜜胰蛋白酶解多肽,其中71.15%来自蜂王浆主要蛋白(MRJPs),鉴定出的肽段归属于10种蛋白质,其中6种(60%)属于MRJP家族蛋白。对椴树蜂蜜酶解多肽质谱鉴定结果进行重复性分析,2次以上重复质谱分析可实现对椴树蜂蜜多肽(87.1%)的可靠鉴定。结合文献报道的蜂蜜多肽抗氧化活性的构效关系,筛选出11条可能具有抗氧化活性的多肽。化学合成11条多肽后,进行4种不同的抗氧化活性实验。结果表明,这11条多肽的抗氧化活性存在较大差异,其中1 g/L VIYEWK多肽显示出较强的ABTS自由基清除活性(33.8%±0.6%)、DPPH自由基清除活性(96.5%±0.0%),并表现出一定的还原力(0.010±0.001)和Fe~(2+)螯合活性(4.0%±0.2%)。该方法能快速有效鉴定椴树蜂蜜多肽结构,可为揭示椴树蜂蜜多肽结构与抗氧化活性的关系提供依据。

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