无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化
【摘要】:以大粒无核葡萄‘皇家秋天’的基因组DNA为模板,对无核葡萄SRAP-PCR反应体系的主要成分及反应退火温度进行优化。获得的最优SRAP-PCR反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性1min,38℃复性1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,56℃复性1 min,72℃延伸1min,35个循环;72℃终延伸10 min。25μL体系中,模板DNA 40ng,Mg2+1.5mmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,引物0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶0.6U。实验结果表明,优化后的SRAP-PCR反应体系扩增多态性高,带型清晰,稳定性好。
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