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应用LAMP技术对4种疟原虫进行属种鉴定的初步研究

易海华  祝长青  孙慧宇  吴萍兰  徐波  房超  宋阳威  王云飞  徐政  赵金伟  徐继承  
【摘要】:目的建立对4种感染人的疟原虫虫属及定量的环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)基因检测方法。方法根据恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间日疟原虫的18SrRNA基因共有保守序列及LAMP技术原理,设计一套含有6条疟原虫虫属特异性引物的LAMP反应体系,产物经SYBR GreenⅠ进行显色反应及电泳分析,观察其特征条带的情况,利用LAMP技术检测上述4种疟原虫DNA及其它12种相关寄生虫DNA评价反应特异性,利用PCR技术为参照对LAMP技术检测疟原虫虫属试验的敏感性,利用疟原虫重组质粒探索建立疟原虫LAMP定量的可能性。结果 4种疟原虫LAMP产物经显色后呈绿色,经电泳后呈特征性梯状条带,阴性对照及其它相关寄生虫DNA无明显扩增,重组质粒浓度在1.42×104~1.42×109拷贝/μl范围内时,反应循环阈值与模板浓度有良好的线性关系(r=0.9995)。与PCR方法相比较,建立的疟原虫虫属LAMP检测方法的敏感性是其10倍,检出限达到1.42×101拷贝/μl。结论建立的检测疟原虫属种、数量的LAMP方法具有较高的特异性和敏感性,适合疟疾防治检测的需要。

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