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HMGB1/PTEN通路对造血干细胞功能影响的体外实验

李成龙  周华  黄娟  王文  肖蓉  
【摘要】:目的 分析高迁移率族蛋白(HMG)B1/张力蛋白同源物(PTEN)通路对造血干细胞(HSCs)功能的影响。方法 采用免疫磁珠分选法分离健康人骨髓血HSCs,将其分为对照组和HMGB1 siRNA组,HMGB1 siRNA组转染HMGB1 siRNA质粒,对照组转染非特异性的siRNA(NS siRNA),采用RT-PCR检测转染效率。Western印迹检测HMGB1、PTEN、转化生长因子(TGF)-β1、p21和细胞周期素依赖激酶(CDK)4的表达;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测两组细胞周期和细胞凋亡;比较两组细胞的红系祖细胞(CFU-E)、粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)、巨核系祖细胞(CFU-MK)和多向造血祖细胞(CFU-Mix)形成能力。结果 与对照组相比,HMGB1 siRNA组HSCs细胞HMGB1、PTEN和CDK4的表达明显下调(P0.05),TGF-β1和p21表达明显上调(P0.05),细胞增殖能力明显下降(P0.05),G0期细胞明显减少(P0.05),G1期细胞明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.05),CFU-E、CFU-GM、CFU-MK和CFU-Mix集落形成能力均明显下降(P0.05)。结论 HMGB1缺失可能通过抑制PTEN的表达,激活TGF-β1信号通路,抑制HSCs的自我更新和定向分化能力。

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