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沉默Livin基因表达对结肠癌LoVo细胞生物学特性的影响

邹爱民  高文香  朱文芳  沈建军  
【摘要】:目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默结肠癌细胞株LoVo中Livin基因的表达,研究Livin对LoVo细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响。方法:构建针对Livin基因的干扰质粒pSilencer4.1-L1和pSilencer4.1-L2,转染LoVo细胞,通过RT-PCR、Western blotting检测转染后LoVo细胞Livin的表达,并用流式细胞术、克隆形成实验、MTT法检测转染后LoVo细胞的凋亡、细胞周期、克隆形成、增殖以及对顺铂的敏感性。结果:成功构建pSilencer4.1-L1、pSilencer4.1-L2干扰质粒,pSilencer4.1-L1可有效沉默LoVo细胞中Livin mRNA和蛋白的表达(P0.01),但pSilencer4.1-L2效果不明显。与对照组相比,pSilencer4.1-L1转染后LoVo细胞的凋亡率增加[(24.2±3.2)%vs(8.1±1.4)%,P0.01];细胞增殖明显抑制,转染后72 h增殖抑制率约70%;细胞的克隆形成率明显下降[(15±4.6)%vs(85±5.8)%,P0.01];S期细胞明显增加[(45.7±4.9)%vs(28.0±3.0)%,P0.01],G_1期细胞明显减少[(43.0±5.2)%vs(62.8±5.1)%,P0.01];对顺铂的敏感性增加,细胞凋亡率增加[(65.3±6.2)%vs(43.4±6.9)%,P0.01]。结论:pSilencer4.1-L1可有效沉默结肠癌LoVo细胞中Livin基因的表达,抑制细胞增殖和克隆形成、诱导细胞凋亡、增加细胞对顺铂的敏感性。

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