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慢病毒介导shRNA特异性沉默livin基因促进SPC-A1细胞凋亡

陈愉生  李鸿茹  林明  陈刚  谢宝松  许能銮  林立芳  
【摘要】:目的:建立慢病毒介导的livin基因沉默系统,探讨其对肺癌细胞凋亡的影响。方法:Livin shRNA慢病毒感染肺腺癌细胞株SPC-A1沉默livin基因表达。应用PI染色经荧光镜下观察SPC-A1细胞凋亡形态,流式细胞术检测SPC-A1细胞凋亡率及亚二倍体峰形成,Real-timePCR及Western blotting方法检测livin和caspase3表达的改变。结果:livin基因在肺腺癌细胞株SPC-A1中持续高表达。经慢病毒介导shRNA使livin基因表达沉默后,镜下可见肺腺癌细胞出现典型凋亡形态特征,流式细胞术检测出现亚二倍体峰,细胞凋亡率较空白对照及阴性病毒对照细胞明显增加(8.21%vs0.08%,0.13%;P0.05),RT-PCR及Western blotting检测结果显示,caspase3mRNA表达无改变,但cleaved-caspase3蛋白表达上调。结论:慢病毒载体介导的shRNA能抑制肺腺癌细胞株SPC-A1中livin基因的表达,从而促进SPC-A1细胞凋亡。

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