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刚地弓形虫RH株速殖子在HeLa细胞系体外培养的实验观察

吴亮  陈盛霞  李琳婕  车飞虎  邓红艳  姜旭淦  
【摘要】:目的建立稳定高效的刚地弓形虫RH株速殖子(以下简称弓形虫速殖子)体外培养模型。方法①将HeLa细胞(1×104个)接种置于细胞培养皿内底部的盖玻片,12h后将纯化的弓形虫速殖子接种于细胞培养皿(1×104个/皿),继续培养0.5~96h,观察弓形虫速殖子在HeLa细胞内增殖情况;②将纯化的弓形虫速殖子接种于HeLa细胞后分为2组,一组于37℃分别培养24~120h后,移入25℃培养120h;另组于37℃培养48h后,移入25℃分别培养72~168h,观察不同温度和时间对弓形虫速殖子产率和活虫率的影响;③当培养的HeLa细胞80%发生细胞融合时更换速殖子培养液,同上法12h后接种纯化的弓形虫速殖子进行培养,当80%HeLa细胞被感染增殖的弓形虫速殖子涨破时,收集、计数弓形虫速殖子,并用其感染(3×106个/瓶)新的HeLa细胞,观察其连续传代情况;④每隔5代取弓形虫速殖子,腹腔接种昆明小鼠(3×106个/只),观察小鼠存活时间、评价该体外培养条件对弓形虫速殖子毒力的影响。结果接种弓形虫速殖子96h后HeLa细胞均被感染及涨破,培养弓形虫速殖子30代(3~4d为1代)增殖稳定,每代获得弓形虫速殖子1×107~5×107个,增殖5~20倍。各代弓形虫速殖子对昆明小鼠的平均致死时间为5.80~6.40d,毒力未见减弱(P0.05)。HeLa细胞接种弓形虫速殖子,于37℃培养72h后,移至25℃培养120h,其产率高达40倍以上,活虫率为90%以上,仅残留极少量Hela细胞。结论刚地弓形虫RH株速殖子可在HeLa细胞中增殖并长期稳定传代。

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