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包虫病诊断抗原分子Eg-00512的筛选、重组表达及抗原性鉴定

佟雪琪  赵殷奇  李子华  朱明星  王浩  赵嘉庆  宋佳卉  牛楠  徐士梅  赵巍  
【摘要】:目的筛选细粒棘球绦虫原头蚴抗原分子Eg-00512,并进行重组表达、纯化及免疫特性鉴定,以期作为棘球蚴病特异性诊断抗原。方法对国家人类基因组南方研究中心(CHGCS)发表的细粒棘球绦虫4个不同发育阶段的表达谱数据进行差异比较分析,筛选仅在原头蚴阶段特异表达的基因Eg-00512;利用DNAStar软件包对其编码蛋白Eg-00512进行抗原表位分析;选取合适的序列片段作为目的片段,构建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,经诱导表达、纯化获得重组蛋白rEg-00512。将BALB/c小鼠随机分为免疫组、佐剂对照组、PBS对照组,分别经皮下多点注射重组蛋白、PBS+弗氏佐剂和PBS,2周后加强免疫一次。分别于免疫前,第一次免疫后2、4周每组小鼠尾静脉采血,免疫后5周摘眼球法采血,采用ELISA检测各时间点血清中特异性IgG抗体水平变化;以该血清为一抗,采用Western blot分析重组蛋白的免疫反应性。结果筛选出仅在细粒棘球蚴原头蚴阶段高表达的Eg-00512基因。该基因编码203个氨基酸,分子质量单位为23ku,其抗原表位主要位于1-15、55-93、111-119、126-149、166-194和199-202氨基酸残基及其附近。成功构建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,经IPTG诱导表达重组蛋白rEg-00512。重组蛋白rEg-00512纯化后免疫小鼠诱导产生特异性IgG抗体,其中免疫5周时抗体达最高水平A450值为1.807±0.767,与佐剂对照组0.111±0.014和PBS对照组0.132±0.0246比较差异有统计学意义(P0.01)。Western blot显示,该重组抗原可被免疫鼠抗血清及细粒棘球蚴原头蚴感染鼠血清识别,而不与正常小鼠血清反应。结论成功筛选并获得重组蛋白rEg-00512,该蛋白具有较好的抗原性,可作为棘球蚴病免疫诊断候选抗原。

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11 陈伟,薛海筹,裘丽姝;细粒棘球绦虫基因库的构建[J];寄生虫学与寄生虫病杂志;1991年02期
12 岑衍华;;细粒棘球绦虫可在体外形成脱壳的卵[J];地方病译丛;1992年06期
13 Rujing Ming;严雷;;中国新疆维吾尔自治区狗群中细粒棘球绦虫的分布情况[J];地方病译丛;1993年05期
14 王萍;丁兆勋;;新疆不同地区犬细粒棘球绦虫形态学特征进一步观察[J];新疆医学院学报;1993年03期
15 王虎;不同株细粒棘球绦虫成虫和幼虫的观测结果比较[J];青海医药杂志;1994年04期
16 李珣 ,缪军;细粒棘球绦虫:硫氧还蛋白过氧化物酶的克隆[J];国外医学(寄生虫病分册);2000年01期
17 钟石根;阿根廷细粒棘球绦虫的遗传变异和流行病学[J];国外医学(寄生虫病分册);2000年02期
18 单连玉;细粒棘球绦虫成虫分泌14-3-3蛋白[J];国外医学(寄生虫病分册);2002年01期
19 林仁勇,丁剑冰,温浩,张文宝,李君,卢晓梅;新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段95抗原基因克隆及序列分析[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2003年03期
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5 石保新;张壮志;王进成;李欣;雒燕;张文宝;;爱普锐克-食肉动物自动吞食片对犬细粒棘球绦虫驱除试验[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
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7 赵殷奇;细粒棘球绦虫不同发育阶段表达谱的差异分析及特异性诊断抗原筛选的研究[D];宁夏医科大学;2016年
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9 贾海英;细粒棘球绦虫pET30a-EgA31-Eg95重组质粒构建及鉴定[D];新疆医科大学;2009年
10 王红丽;细粒棘球绦虫丝裂原活化蛋白激酶信号通路基因的克隆、表达及鉴定[D];新疆大学;2010年
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1 记者 胡德荣;我学者破译细粒棘球绦虫基因密码[N];健康报;2013年
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