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外源性微卫星序列转染RER~+细胞株观察肿瘤细胞遗传不稳定性的研究

汪承亚  丁小键  倪黎  盛瑞兰  王兰华  
【摘要】:目的利用RER(replicationerror)表型的人肿瘤细胞株,在体外观察肿瘤细胞微卫星序列(MS)频发突变,研究人类肿瘤细胞基因组DNA的遗传不稳定性。方法把含有人工合成的简单重复序列(CA)14和LacZ标志基因的重组质粒pCMV-CAR经Lipofection方法转染RER+或RER-人结肠癌细胞株。(CA)14插入LacZ编码序列之中,干扰了LacZ基因的正确读码。当(CA)14序列发生碱基缺失或插入突变,碱基数变为3的倍数时LacZ基因读码框恢复,表达产生有生物活性的β-半乳糖苷酶。后者通过X-gal染色检出。结果转染pCMV-CAR的细胞克隆经Hygromicin筛选并建株培养,观察到部份RER+的质粒转染克隆,LacZ能正确读码表达,经X-gal染色试验,细胞变蓝。蓝细胞在建株培养后的传代过程中持续存在。而RER-细胞株,pCMV-CAR转染克隆用X-gal染色未见任何蓝色细胞。结论外源性(CA)14序列在RER+细胞转染克隆中可以发生碱基丢失或插入突变。直接反映了肿瘤细胞DNA的不稳定性和复杂的突变状态。并提示外源性(CA)14可为研究环境因素对人体肿瘤DNA突变影响提供直接的观察指标

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