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三核苷酸重复序列PCR扩增中影子带的产生及其消除的方法

武辉  张思仲  肖翠英  
【摘要】:目的为了消除PCR扩增三核苷酸重复序列时产生的影子带。方法以人类强直性肌营养不良致病基因-肌张力蛋白激酶基因(myotoninproteinkinasegene,MT-PK)3′端非翻译区中的CTG重复序列为例,主要比较了PCR反应中单独使用TaqDNA聚合酶和使用Taq+Pwo混合的DNA聚合酶对影子带产生的影响。结果实验表明PCR反应中单独使用TaqDNA聚合酶时,其PCR产物经PAGE电泳,银染显色后常有影子带形成,而向TaqDNA聚合酶中加入具有3′-5′外切酶活性的PwoDNA聚合酶则可完全消除影子带。结论本实验结果表明影子带产生于PCR过程本身,而比TaqDNA聚合酶具有更高加工性

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