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基于网络药理学和实验验证探讨盘龙七片从PI3K/AKT信号通路干预大鼠椎动脉型颈椎病的机制

明瑞蕊  张彦琼  徐颖  徐腾腾  方罗昌婷  王金霞  王潇潇  胡智星  杨超  贾可欣  王璐  刘春芳  林娜  
【摘要】:该项目拟在前期已证明盘龙七片有效治疗椎动脉型颈椎病(vertebral artery type of cervical spondylosis, CSA)的基础上,采用网络药理学整合动物实验验证的研究策略进一步探索相关作用机制。运用生物网络分析建立药物-疾病互作网络,发现盘龙七片的关键候选靶标富集多条与CSA病理环节相关通路,其中磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(protein kinase B, AKT/PKB)信号通路富集程度最为显著。进一步,采用混合造模法建立CSA大鼠模型,设正常组,模型组,盘龙七片低、中、高剂量(0.16、0.32、0.64 g·kg~(-1))组和颈复康颗粒(1.35 g·kg~(-1))组,造模成功后连续给药8周,苏木素-伊红染色法检测大鼠颈椎肌肉组织的病理改变,酶联免疫吸附法检测大鼠血清和/或颈椎组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、CC趋化因子配体2[chemokine (C-C motif) ligand 2, CCL2]含量变化,免疫印迹法检测大鼠颈椎组织中CC趋化因子受体2[chemokine (C-C motif) receptor 2, CCR2]、PI3K、AKT、磷酸化丝氨酸-苏氨酸激酶(phosphorylation-protein kinase B)、IκB激酶β(I-kappa-B-kinase beta, IKK-beta/IKKβ)、核转录因子κB (nuclear factor kappa B,NF-κB P65)和磷酸化核转录因子κB (phosphorylation-nuclear factor kappa B,p-NF-κB P65)的蛋白表达水平,免疫荧光法检测大鼠颈椎肌肉组织中p-NF-κB P65的阳性表达情况。结果表明盘龙七片不同剂量组可有效改善CSA大鼠颈椎肌肉组织中肌纤维变性和炎症病变程度,降低血清和/或颈椎组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、VEGF、CCL2和CCR2含量,下调颈椎组织中PI3K、p-AKT、IKKβ和p-NF-κB P65蛋白表达含量以及p-NF-κB P65入核水平。表明了盘龙七片口服能显著抑制CSA大鼠的炎症反应,其作用机制可能与下调PI3K/AKT信号通路活化有关。

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