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丹皮酚通过下调miR-155/JAK1-STAT1通路抑制巨噬细胞M1极化

孙颖  刘玲  施晓艳  何海  黄翰文  戴敏  
【摘要】:探究丹皮酚(paeonol)对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7 M1型极化的影响,并从基因层面探讨该干预作用是否与miR-155的下调及下游JAK1-STAT1通路受抑制有关,进一步为丹皮酚抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的分子机制提供新的思路。实验采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)共刺激24 h建立巨噬细胞M1型极化的模型,丹皮酚在刺激前24 h给予细胞起到预保护作用。CCK-8法检测LPS和IFN-γ共刺激对细胞的损伤作用,流式细胞术检测M1型表面标志物F4/80和CD86的表达,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌,RT-qPCR法检测各组细胞miR-155的表达,Western blot法检测JAK1-STAT1-SOCS1通路上的蛋白表达。结果显示,LPS和IFN-γ在最适浓度下对细胞没有明显损伤作用,但可诱导巨噬细胞向M1极化,使得细胞表面的M1型标志性因子F4/80和CD86高表达,同时导致细胞表面炎症因子IL-6和TNF-α的分泌增多(P0.05或P0.01)。丹皮酚可显著降低RAW264.7细胞由LPS和IFN-γ诱导的表面M1型标志物F4/80和CD86的高表达,同时减少了炎症因子IL-6和TNF-α的分泌(P0.05或P0.01),降低了miR-155的表达水平,显著下调了JAK1-STAT1的蛋白磷酸化水平,上调SOCS1蛋白表达(P0.01)。结果表明,丹皮酚通过下调细胞表面标志性因子及细胞分泌的炎症因子,达到抑制巨噬细胞M1型极化的作用,这种作用可能与丹皮酚下调miR-155的表达,抑制JAK1-STAT1通路的活化有关。

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