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狂犬病病毒SRV_9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析

袁慧君  扈荣良  张守峰  张茂林  涂长春  
【摘要】:根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列 ,设计并合成了一对引物。从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA ,通过RT_PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列。测序结果显示 ,其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET_2 8b ( +)中 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3 )plyss,于 3 0℃ 1mmol/LIPTG条件下诱导表达。大肠杆菌菌体裂解产物经SDS_PAGE分析 ,在分子量约为 5 6kDa处出现一新的蛋白带 ,和预期的目的蛋白分子量相符。Western_blotting检测表明 ,表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应 ,出现单一反应带。扫描分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 2 3 %。包涵体分离、纯化后 ,纯度达 89%。上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。

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