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幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析

范贵荣  杨致邦  栗俊杰  郭丽媛  向瑜  韩飞  
【摘要】:目的探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性。方法克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白。SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件。Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性。结果4 mol/L醋酸钠溶液、pH13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件。经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,West-ern blot显示该蛋白具有良好的抗原性。小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶16,具有良好的免疫原性。结论切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究。

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