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SFTSV实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

于志亚  杨鸣发  马云云  康洪涛  姜骞  刘家森  李广兴  曲连东  
【摘要】:为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法,根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。当质粒标准品浓度为4.22×10~2~4.22×10~9copies/μL时,荧光定量标准曲线C_t值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.999 8。该方法对发热伴血小板减少综合征病毒最低检测限为4.22×10~1copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍;该方法可特异性地检测出SFTSV,而对同科其他病毒检测结果均为阴性;批内、批间变异系数均小于2%。对采集的200只蜱进行检测,阳性检出率为3.5%,而常规RT-PCR方法的阳性检出率为2%。研究结果表明,本研究建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好,为发热伴血小板减少综合征的检测提供了技术手段。

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