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布鲁氏菌RPA-LFD快速检测方法的建立与应用

张珊珊  李楠  郝镯  孟轲音  刘军  
【摘要】:为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断布病的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与胶体金侧向流试纸条技术(lateral flow dipstick,LFD)相结合。根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,通过对反应条件、体系的优化,以及对敏感性、特异性以及模拟样本的分析,最后进行临床应用,建立一种可以检测布鲁氏菌的RPA-LFD方法。结果显示,成功建立了布鲁氏菌RPA-LFD检测方法,最佳反应条件为闭合手掌中孵育12 min;引物与探针的最佳比为3.5∶1;RPA-LFD方法的最低检测限为5.89 CFU/m L,能够特异地检测出布鲁氏菌,检测大肠杆菌等其他细菌结果均为阴性;用RPA-LFD方法检测模拟样本和临床样品的结果与ELISA方法一致。上述结果表明,本研究建立的布鲁氏菌RPA-LFD检测方法特异性强、灵敏性高、操作简单,可广泛应用于临床检测。

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