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羊痘病毒实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立

康文玉  徐自忠  花群义  杨云庆  周晓黎  董俊  尹尚莲  高洪  
【摘要】:参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300 nmol/L引物浓度和200 nmol/L探针浓度,获得的Cr值较小,而△Rn最大;可检测到相当于0.1 TCID50的病毒DNA;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.999 5以上;组内和组间试验重复性的变异系数分别为2.3%和3.4%;与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,可同时检测大量样品等优点。表明。荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法,可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。

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