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抗人VEGF单链抗体基因的克隆及突变校正

廖楚航  王大章  杨西川  李扬  房思炼  
【摘要】:目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力。方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF单克隆抗体(E11)的可变区基因片段,构建表达载体pET-15b(含E-tag)。将V11轻、重链可变区基因序列(V11L、V11H)与其所属亚组共同序列和一致序列进行联配比较,发现异常氨基酸并分析其性质,确定异常突变点。PCR定点回复突变,重新表达单链抗体基因(V11m),ELISA检测表达产物与VEGF165的结合。结果:V11存在四个异常突变点:V11L第7、23、36位,V11H第113位。回复突变后

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