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microRNA-378b对心脏成纤维细胞纤维化水平的影响及机制研究

姜敏  李姗姗  王春  郑闻  张伟  邓慧  戴阳  顾寰宇  
【摘要】:目的 研究microRNA-378b(miR-378b)对心脏成纤维细胞的纤维化水平的影响及分子机制。方法 小鼠行慢性心肌梗死手术构建体内心肌纤维化模型,利用转化生长因子-β(TGF-β)诱导原代心脏成纤维细胞发生纤维化以构建体外心肌纤维化模型;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测2种纤维化模型中miR-378b的表达水平;Western blotting法检测miR-378b模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA,心肌纤维化特异性指标)表达量的影响;TargetScan、miRDB和miRWalk软件预测miR-378b的下游靶基因,双荧光素酶实验验证miR-378b与生长相关蛋白43(GAP43)的靶向关系;Western blotting法检测miR-378b模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞GAP43表达的影响;Western blotting法检测体内和体外2种纤维化模型中GAP43的蛋白水平。结果 小鼠心肌纤维化模型组miR-378b表达量较假手术组显著降低(P0.01),心脏成纤维细胞TGF-β处理组miR-378b表达量较对照组显著降低(P0.001)。在基础水平和TGF-β处理后,与对照模拟物组比较,miR-378b模拟物显著降低细胞的α-SMA蛋白水平(P0.05);在基础水平,与对照抑制物组比较,miR-378b抑制物可显著升高细胞的α-SMA蛋白水平(P0.05);但在TGF-β处理的细胞中,miR-378b抑制物不能进一步增加α-SMA蛋白表达量。GAP43是miR-378b直接作用的下游靶基因,与对照组比较,miR-378b可负调控心脏成纤维细胞GAP43的蛋白表达水平(P0.01)。心肌纤维化模型组小鼠心肌GAP43蛋白表达量较假手术组显著升高(P0.01),心脏成纤维细胞TGF-β处理组GAP43蛋白表达量较对照组显著升高(P0.001)。结论 miR-378b可抑制心脏成纤维细胞纤维化,该功能可能通过抑制其下游靶基因GAP43发挥作用。

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