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咖啡酸抗H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及机制探讨

熊丹  严奉祥  欧和生  
【摘要】:目的:用H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞株凋亡建立氧化应激模型,观察咖啡酸对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)凋亡的保护作用并初步探讨其机制。方法:分别用不同浓度的咖啡酸和H_2O_2处理HUVEC-12,通过四甲基偶氮唑盐还原法(MTT法)检测细胞的活力,流式细胞术测定内皮细胞凋亡率,用吖啶橙溴化乙啶荧光染色(AO-EB染色)观察细胞凋亡形态,Western blotting检测NF-κB、P53和Bcl-2的表达。结果:用0.5 mmol/L H_2O_2和不同浓度咖啡酸共同孵育24 h,MTT提示咖啡酸能明显减轻H_2O_2对HUVEC-12的损伤,提高细胞的存活率,流式细胞检测术提示咖啡酸能使H_2O_2诱导的HUVEC-12凋亡率由21.9%±2.1%降至3.8%±1.1%。AO-EB染色提示咖啡酸能降低H_2O_2诱导的细胞凋亡,使凋亡细胞减少;同时NF-κB和P53表达上调,Bcl-2表达下调。结论:不同浓度的咖啡酸对H_2O_2引起的HUVEC-12损伤有保护作用,并呈现一定的浓度依赖性和时效性,其机制可能与调节NF-κB、P53和Bcl-2蛋白的表达有关。

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