靶向HER2和CLDN18.2的并联嵌合抗原受体T细胞降低对胃癌的脱靶效应

【摘要】：目的 探讨靶向闭合蛋白18亚型2(CLDN18.2)和人类表皮生长因子受体2(HER2)的双受体嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞是否可以降低脱靶效应，并发挥抑制胃癌细胞生长的作用。方法 Western blot和流式细胞术检测肿瘤细胞中CLDN18.2和HER2的表达情况；慢病毒感染法构建过表达CLDN18.2和HER2的肿瘤细胞系；慢病毒感染法构建CAR-T细胞；流式细胞术检测CAR-T细胞的阳性率和亚型分布；乳酸脱氢酶(LDH)法检测CAR-T细胞对靶细胞的细胞毒性；裸鼠移植瘤模型检测CAR-T细胞的体内抑瘤效率；免疫组化法检测肿瘤组织中CD3~+ T细胞的浸润情况。结果 成功筛选得到高表达或不表达CLDN18.2和HER2的胃癌细胞系，并构建得到CLDN18.2和HER2单独表达或同时表达的胃癌细胞系；成功构建CAR-T细胞Cz、Hbb和CHbbz; Cz和CHbbz在体外对CLDN18.2~+和CLDN18.2~+ HER2~+的肿瘤细胞系均具有特异性的剂量依赖的细胞毒性(P0.001);在裸鼠移植瘤模型中，只有CHbbz可以对CH-AGS的肿瘤细胞产生体内抑瘤活性及T细胞的肿瘤浸润(P0.01),同时CHbbz只对CLDN18.2~+ HER2~+的肿瘤细胞产生抑瘤活性及T细胞的肿瘤浸润(P0.01)。结论 靶向CLDN18.2和HER2的双受体CAR-T细胞可以降低脱靶毒性发生的概率，并抑制胃癌的生长，是一种胃癌治疗的潜在方法。