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人高密度脂蛋白受体胞外片段在甲醇酵母中的表达

胡箭  洪斌  李元  
【摘要】:高密度脂蛋白受体在胆固醇逆向运输中起重要作用 ,并且其可以做为动脉粥样硬化的新型治疗靶点。为了构建以竞争性受体 -配体相互作用为基础的体外高通量药物筛选模型 ,在甲醇酵母中表达了高密度脂蛋白受体胞外结构域。应用RT -PCR方法从人肝癌Bel- 740 2总RNA中扩增了编码高密度脂蛋白受体胞外结构域的基因片段 ,此基因片段经测序证实后亚克隆至甲醇酵母分泌表达质粒pPIC9K中。经测序验证读码框正确后将重组质粒电转至PichiapastorisGS115中。应用PCR方法确定目的基因的整合和Mut+ 表型。重组菌株用 1%甲醇诱导 5天后取发酵上清进行SDS -PAGE和Westernblot分析。结果表明 ,在分子量约 64 5kDa处有sHDLR表达。随后应用DiI-AcLDL为配体证明了表达的sHDLR具有结合其配体AcLDL的生物学活性。

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