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乌司他丁通过Nrf2/HO-1抗氧化途径在OVA诱导的支气管哮喘小鼠中发挥治疗作用

宋冬梅  牛英豪  于磊  王宝山  
【摘要】:目的课题组之前的研究已证实在OVA诱导的哮喘小鼠模型中,乌司他丁通过抑制ROS的产生、诱导抗氧化酶的表达,起到治疗哮喘的作用,但具体机制尚不清晰;此研究将以Nrf2/HO-1这一氧化应激的关键通路为切入点,深入探讨乌司他丁抗氧化作用的潜在机制。方法建立OVA诱导的小鼠哮喘模型,腹腔注射乌司他丁(100 k U·kg-1·d-1)进行治疗,对照组用PBS(p H 7.4)代替;检测气道高反应性;ELISA法检测小鼠BALF中IL-4、IFN-γ、总Ig E及特异性Ig E的表达水平;双氢罗丹明(DHR)-123方法检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞中ROS含量;检测小鼠肺组织中蛋白羰基含量(protein carbonyl)和丙二醛(MDA)水平;抗氧化酶试剂盒检测小鼠BALF中的抗氧化酶;Western blot及Real-time PCR检测小鼠肺组织中HO-1在蛋白和基因的表达水平;Western blot、IF及EMSA检测Nrf2核转移及结合活性。结果乌司他丁治疗组明显降低气道高反应;降低BALF中IL-4、特异性Ig E及ROS的表达水平,降低小鼠肺组织Protein carbonyl含量和MDA水平,提高IFN-γ、SOD、GSH和TAOC等抗氧化酶的表达水平,其治疗作用可被HO-1抑制剂Znpp逆转;乌司他丁诱导小鼠肺组织中的HO-1在蛋白水平的表达呈明显剂量和时间依赖性;乌司他丁诱导Nrf2的核转移,增强Nrf2的结合活性并提高HO-1基因水平表达。结论乌司他丁在OVA诱导的哮喘小鼠模型发挥抗氧化治疗作用,其作用机制可能是通过Nrf2/ARE途径诱导HO-1的表达实现。

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