存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

【摘要】：本研究旨在构建含有人存活蛋白(survivin)基因的重组腺病毒载体,并探讨其在转染树突状细胞中的表达。以质粒pcDNA3.0-survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全长序列。PCR产物回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pShuttle-CMV-survivin。通过双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pShuttle-CMV-survivin转化E.coliBJ5183菌(含腺病毒骨架质粒)并进行同源重组,然后筛选阳性克隆,提取质粒,将此重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,将病毒上清转染树突状细胞,应用Westernblot方法分析survivin的表达。结果表明成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.65×109pfu/ml。Westernblot鉴定显示,经重组腺病毒转染的DC可有效表达survivin。结论含survivin基因的重组腺病毒载体的构建成功,为下一步开展抗白血病免疫研究奠定实验基础。

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3	张德礼;腺病毒载体构建及在疫苗研制上的应用[J];生物技术通报;1992年11期
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6	王琪,卢大儒,邱信芳,薛京伦,颜永碧,郑尊;腺病毒载体中凝血因子IX基因表达的电镜检测[J];电子显微学报;1996年05期
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1	朱锋;蛋白聚糖Ⅱ重组腺病毒载体对高糖环境下大鼠肾系膜细胞细胞外基质mRNA水平的影响[D];浙江大学;2005年
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5	武猛;体内转染腺病毒载体Ad/CMV-hTGF-β1对兔椎间盘退变保护作用的研究[D];青岛大学;2005年
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10	寿成珉;腺病毒介导的蛋白聚糖Ⅱ基因转染对高糖环境下大鼠系膜细胞增殖，TGF-β1及细胞外基质的作用[D];浙江大学;2006年

中国重要报纸全文数据库

前10条

1	记者王雪飞;支架+转基因可减少心脏介入术后血管再狭窄[N];健康报;2000年
2	洪奇;基因疗法改良皮肤细胞生物新材料修复骨缺损[N];中国医学论坛报;2001年
3	繁星;埃波拉病毒疫苗研究进展[N];中国医学论坛报;2001年
4	;基因治疗冠心病的研究概况_（五）[N];中国医学论坛报;2001年
5	陈松鹤;慢性淋巴性白血病的基因治疗[N];中国医学论坛报;2001年
6	解放军三零二医院传染病研究所基因治疗研究中心成军;肝纤维化的基因治疗研究进展[N];中国医学论坛报;2001年
7	记者赵路;科学家开辟心血管病治疗新途径[N];科学时报;2002年
8	王吉云;基因疗法可将心肌细胞转变为起搏细胞[N];中国医学论坛报;2002年
9	宁育摘译;人组织激肽释放酶：缺血性疾病靶向治疗新突破[N];中国医学论坛报;2002年
10	孙伟平;脑梗死———基因治疗的潜在目标[N];中国医学论坛报;2003年

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