利用CRISPR/Cpf1系统构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的293T细胞株

【摘要】：【目的】基于CRISPR/Cpf1(AsCpf1/LbCpf1)技术构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的人胚肾细胞(HEK293T)稳定细胞株,旨在研究ABCG1和ABCG4基因的生物学功能。【方法】针对ABCG1和ABCG4基因作用的功能域,设计2对靶向ABCG1和ABCG4基因前7个外显子的sgRNA序列,分别克隆到AsCpf1和LbCpf1的载体上。将测序验证正确的重组质粒转染到HEK293T细胞中,T7E1酶切和测序验证敲除效率,对敲除成功的293T细胞利用有限稀释法筛选获得基因双突变的敲除细胞株,对其基因组进行PCR扩增并双向测序验证编辑结果,选择有正确编辑结果的PCR产物进行TA克隆,进而测序验证单克隆细胞株编辑效率。【结果】结果获得敲除ABCG1和ABCG4基因的稳定细胞株各1株(AsCpf1-ABCG1-sgRNA 1-1和LbCpf1-ABCG4-sgRNA 2-1)。【结论】通过利用新型基因编辑技术CRISPR/Cpf1系统,获得了永久性敲除目的细胞靶基因的细胞株,可为进一步探索和证实ABCG1和ABCG4在细胞中胆固醇代谢和调节作用提供帮助。

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3	姬十三;“基因敲除”敲开疾病之门[N];南方周末;2007年
4	李旻本报实习记者甘勃;基因敲除开启生命科学新纪元[N];大众科技报;2007年
5	黄博纯;我科学家新建立两种基因敲除克隆猪模型[N];科技日报;2014年
6	王爱华　邓敏孔令坤;基因敲除:基因工程猪或可助器官移植[N];新华每日电讯;2011年
7	李斌孙青原;留美中国学者答疑记者基因敲除克隆猪是什么？[N];中国高新技术产业导报;2002年
8	本报记者张晔;此“基因编辑”非彼“基因编辑”[N];科技日报;2016年

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