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猪肺炎支原体P46基因的原核表达与间接ELISA方法的建立

沈青春  王芳  韩明远  覃青松  范学政  杨汉春  宁宜宝  
【摘要】:猪肺炎支原体是猪喘气病的病原体,本研究选择猪肺炎支原体P46膜蛋白基因亲水区序列进行克隆,并将其内3个编码Trp的TGA突变成TGG,然后再克隆到pET28a(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内实现了高效表达,表达产物相对分子质量约为31ku,约占菌体总蛋白35%,表达形式为包涵体,通过Western blotting证明表达产物与猪肺炎支原体高免血清具有很好的反应原性和特异性。将大肠杆菌表达的猪肺炎支原体P46重组蛋白经过洗涤、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原用于检测猪血清中猪肺炎支原体抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了rP46-ELISA方法,获得了较好的效果,通过与现有ELISA检测方法的比较,结果表明二者间具有较高的符合率。

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