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线粒体靶向肽SS31及RIP抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对H_2O_2诱导的氧化应激损伤ARPE-19细胞的保护作用

许雲  陈泽君  权卓娅  张瑞雪  何蓓蕾  何媛  
【摘要】:目的探讨线粒体靶向肽SS31及RIP抑制剂Necrostatin-1 (Nec-1)对H_2O_2诱导的氧化应激损伤ARPE-19细胞的保护作用。方法选择400μmol·L~(-1) H_2O_2构建氧化应激损伤模型;根据MTT结果筛选出1μmol·L~(-1) SS31、40μmol·L~(-1) Nec-1作为实验最佳浓度。将培养的细胞分为对照组、SS31+Nec-1组、H_2O_2组、SS31+H_2O_2组、SS31+Nec-1+H_2O_2组、Nec-1+H_2O_2组。利用MTT测定细胞存活率,双氯荧光素染色测定细胞活性氧自由基(ROS)水平,JC-1染色测定线粒体膜电位,AnnexinV/PI双染检测细胞PI阳性率,Western blot法检测RIP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,H_2O_2组细胞存活率明显降低(P0.05)。SS31+H_2O_2组、Nec-1+H_2O_2组细胞存活率高于H_2O_2组,差异均有统计学意义(均为P0.05)。荧光显微镜下双氯荧光素染色结果显示,与H_2O_2组相比,SS31+H_2O_2组、Nec-1+H_2O_2组绿色荧光明显减弱,细胞内ROS含量明显减少。流式细胞仪结果显示:与对照组相比,H_2O_2组线粒体膜电位降低的细胞比例升高,差异有统计学意义(P0.05);与H_2O_2组相比,SS31+H_2O_2组、Nec-1+H_2O_2组线粒体膜电位降低的细胞比例降低,差异均有统计学意义(均为P0.05)。AnnexinV/PI双染色结果显示:与对照组相比,H_2O_2组PI阳性率增加;与H_2O_2组相比,SS31+H_2O_2组、Nec-1+H_2O_2组PI阳性率均明显降低,差异均有统计学意义(均为P0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组相比,H_2O_2组RIP3蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与H_2O_2组相比,SS31+H_2O_2组、Nec-1+H_2O_2组RIP3蛋白表达上调作用显著减弱,差异均有统计学意义(均为P0.05)。结论 SS31及Nec-1对H_2O_2诱导的ARPE-19细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用。

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