下调NAD(P)H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤:线粒体SIRT3信号的关键作用
【摘要】：目的:明确内源性NAD(P)H氧化酶4(Nox4)在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法:以H9C2心肌细胞系为研究对象,建立H/R模型,将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H/R组、H/R+NC-siRNA组和H/R+Nox4-siRNA组。采用RNAi方法下调Nox4的表达,MTT比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平,MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS,比色法测定NAD+/NADH的比值,Western blot法测定Nox4和SIRT3表达水平。结果:与对照组相比,H/R组H9C2心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加(P0.05),相对存活率、ATP的水平明显降低(P0.05,P0.01),而线粒体ROS生成明显增加(P0.01),同时NAD+/NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低(P0.05,P0.01)。与H/R组相比,H/R+Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低(P0.05),相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加(P0.05),同时,NAD+/NADH的比值明显降低(P0.01)、SIRT3蛋白水平进一步降低(P0.05)。结论:下调Nox4可加重H/R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激,抑制线粒体能量生成,其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD+/NADH的比值,增加SIRT3的表达而发挥作用。
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