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人骨髓间充质干细胞复合人脐静脉内皮细胞构建预血管化成骨细胞膜片

陈佳  杨艺强  胡晨  陈琦  赵恬  雍敏  马东洋  任利玲  
【摘要】:背景:如何使工程化骨组织移植后能够成活并发挥功能,前提条件是必须含有充足有效的血液供应,而这也正是工程化组织应用于临床的主要障碍之一。目的:探索新的体外构建血管网络的方法以解决工程化骨组织预血管化的问题。方法:人骨髓间充质干细胞以9×10~4/cm~2高密度接种,经成骨诱导连续培养14 d形成细胞膜片,镜下观察细胞形貌,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。然后将培养的人脐静脉内皮细胞以5×10~4/cm~2密度接种到上述细胞膜片上,继续培养至7 d。通过镜下观察、CD31免疫荧光染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色评估血管网形成情况及膜片特性。结果与结论:①经连续培养可获得完整的成骨诱导细胞膜片,茜素红染色和碱性磷酸酶染色呈阳性;②倒置相差显微镜观察发现人脐静脉内皮细胞接种在成骨诱导细胞膜片上逐渐重排,CD31染色显示进行性管腔形成;③接种人脐静脉内皮细胞后构建的预血管化成骨诱导细胞膜片Ⅰ型胶原染色阳性;④结果表明,经成骨诱导后可形成具有成骨特性的细胞膜片,将人脐静脉内皮细胞培养在该膜片上可体外形成预血管化成骨细胞膜片,为优化构建预血管化的骨组织提供了新的理论指导。

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