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成纤维细胞来源诱导性多能干细胞定向分化为血管内皮样细胞及与牙髓干细胞的共培养

吕继忠  
【摘要】:背景:牙髓的血管重建是为组织工程牙髓再生提供养分与能量供给的重要环节。干细胞的选择和血管内皮样细胞的定向分化已经成为真正实现牙髓再生的重要研究方向。目的:将小鼠成纤维细胞来源诱导性多能干细胞定向分化为血管内皮样细胞,探讨其与牙髓干细胞共培养促进血管新生的可行性。方法:(1)采用酶消化法制备小鼠睾丸支持细胞饲养层;(2)外源添加血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导小鼠皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞定向分化为血管内皮样细胞并进行鉴定;(3)建立血管内皮样细胞与牙髓干细胞共培养体系,荧光实时定量PCR检测CD34、血管内皮生长因子mRNA的表达。结果与结论:(1)诱导分化14 d后倒置显微镜下观察到细胞形态改变,呈现血管内皮形态;(2)流式细胞术鉴定诱导分化细胞CD31阳性,呈现内皮细胞表型;(3)诱导分化14 d后,培养液上清中内皮型一氧化氮合酶水平明显高于未分化细胞(P0.01);(4)诱导分化14 d后,与未分化对照组相比,实验组细胞内皮素表达增高(P0.01),前列环素表达降低(P0.01);(5)血管内皮样细胞与牙髓干细胞共培养5 d后,与血管内皮样细胞单独培养组相比,共培养组CD34和血管内皮生长因子表达增高(P0.01);(6)结果表明,小鼠成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞可以定向分化为血管内皮样细胞,与牙髓干细胞共培养后有形成血管的倾向。

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