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不同毒力的分枝杆菌感染促进小鼠RAW264.7巨噬细胞自噬及mTOR和AKT磷酸化

呙阳  周洁  赖小宝  叶舒慧  黄自坤  罗清  李俊明  
【摘要】:目的探讨不同毒力分枝杆菌感染对巨噬细胞自噬水平的影响。方法分别用表达绿色荧光蛋白(GFP)的结核分枝杆菌标准株H37Rv、卡介苗(BCG)和耻垢分枝杆菌Ms1-2c株(Ms)感染小鼠RAW264.7巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞的自噬水平,激光共聚焦显微镜观察细胞内吞噬体与溶酶体的共定位, Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果与对照组相比, RAW264.7巨噬细胞感染H37Rv、 BCG和Ms 24 h后,感染组的自噬水平均显著增加, Ms感染组的自噬水平最高;各感染组的LC3-Ⅱ蛋白表达均上调, H37Rv、 BCG和Ms感染的细胞内吞噬体与溶酶体的共定位率分别为(11.33±0.88)%、(18.33±0.88)%和(48.67±0.66)%, Ms感染组的分枝杆菌与溶酶体共定位最明显。分枝杆菌感染巨噬细胞后, mTOR和AKT表达无明显改变,但其磷酸化水平均显著升高。结论分枝杆菌感染诱导巨噬细胞发生自噬,同时促进mTOR和AKT的磷酸化。

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