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人β防御素4在大肠杆菌中的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定

曹玉红  张光运  张国成  
【摘要】:目的:构建人β防御素4(human β defensin4,HBD4)基因的原核融合表达载体PGEX-4T-2/mHBD4,诱导GST-HBD4融合蛋白在大肠杆菌中表达,并制备其多克隆抗体。方法:从重组克隆载体PMD18-T/HBD4中扩增HBD4成熟肽编码基因,并克隆入PGEX-4T-2中,在IPTG诱导下,表达GST-HBD4融合蛋白。以表达的融合蛋白GST-HBD4作为免疫原免疫家兔制备抗GST-HBD4的抗血清,抗体效价及特异性分别用ELISA和Western blot法鉴定。结果:在大肠杆菌中成功表达Mr约为32000的融合蛋白GST-HBD4。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶128000,Western blot分析抗血清可与原核表达的融合蛋白GST-HBD4特异结合。结论:在大肠杆菌中成功表达了GST-HBD4融合蛋白,并制备了GST-HBD4的抗血清,为进一步研究HBD4蛋白的结构和功能奠定了基础。

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