收藏本站
收藏 | 投稿 | 论文排版

人sTNFR II-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母菌中的表达及其产物分析

张义浜  施立楠  唱韶红  巩新  熊凌霜  吴军  
【摘要】:目的:在毕赤酵母菌中表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白。检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析。方法:从人淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的基因sTNFRII与IgG Fc,然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRII-IgG Fc,并将其插入pPIC9载体中。以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行克隆与表达。采用ELISA筛选高表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白的重组毕赤酵母菌株,对融合蛋白通过还原和非还原SDS-PAGE分析其二聚体结构,采用L929细胞检测融合蛋白抗TNF-α的生物学活性,最后利用荧光辅助糖电泳(FACE)分析融合蛋白的N-糖链。结果:成功地建立了可分泌表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白的重组酵母菌株,摇瓶培养后融合蛋白的表达量为2mg/L。SDS-PAGE和Western blot表明,该融合蛋白能自然形成二聚体结构;可抑制TNF-α对L929细胞的杀伤作用,其中和5×104U/LTNF-α的EC50为170μg/L。FACE分析融合蛋白N-糖链的大小为11~13个糖残基。结论:在毕赤酵母菌中成功地表达了sTNFR II-IgG Fc融合蛋白,为在毕赤酵母菌中表达其他的Fc融合蛋白和抗体提供了参考。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 胡显文;高丽华;陈薇;徐俊杰;赵剑;陈惠鹏;;炭疽毒素受体ATRcDNA的合成和克隆及ATR-Fc融合蛋白的真核表达载体的构建[J];中国生物工程杂志;2005年12期
2 杨湘越;兰小鹏;吴文冰;冯福英;廖剑;朱忠勇;;人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究[J];医学研究生学报;2006年11期
3 牛晓霞;田雅峰;刘金毅;吴晓东;;人sApo2L-Fc的分子构建及其在CHO细胞中的表达[J];中国生物工程杂志;2008年02期
4 高丽华,胡显文,陈薇,徐俊杰,赵剑,陈惠鹏;炭疽毒素受体与人IgG1的Fc段融合蛋白ATR-Fc在CHO细胞中的表达[J];生物工程学报;2005年05期
5 张伍魁;范清林;邹文艺;仲皙;宋礼华;;白蛋白融合α-2b干扰素在毕赤酵母中的表达[J];中国生物工程杂志;2005年12期
6 蒋香梅;叶彬;白垚;武卫华;郑玉强;;蜱抗凝血肽与RGDS肽重组基因在毕赤酵母中的表达及活性分析[J];中国人兽共患病学报;2008年04期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 蒋香梅;叶彬;武卫华;郑玉强;张静;邹晓毅;;蜱抗凝血肽与RGDS肽重组基因在毕赤酵母中的表达[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 吴永;异种EGFR胞外区重组DNA疫苗与蛋白质疫苗的制备及抗小鼠肿瘤作用研究[D];复旦大学;2008年
2 蒋香梅;蜱抗凝血肽与RGDS肽的重组基因构建及真核表达[D];重庆医科大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978