齐墩果酸对氯化汞诱导L02肝细胞损伤的保护作用

【摘要】：目的在明确HgCl_2诱导L02肝细胞损伤的基础上,探讨齐墩果酸(oleanolic acid, OA)的保护作用。方法 L02细胞按照处理方式不同分为:对照组、齐墩果酸组(OA,10μmol/L)、HgCl_2组(HgCl_2,40μmol/L)及齐墩果酸+HgCl_2组(OA+HgCl_2),对照组给予无血清培养基,OA组给予OA溶液预处理8 h, HgCl_2组暴露于HgCl_2溶液6 h, OA+HgCl_2组先给予OA溶液处理8 h,再暴露于HgCl_2溶液6 h。采用MTT检测细胞活力;激光共聚焦检测JC-1探针荧光强度以确定线粒体膜电位;DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Annexin V/PI双染法结合流式细胞仪测定细胞凋亡率;过氧化氢酶(catalase, CAT)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase, T-SOD)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、Caspase 3和Casepase 9试剂盒结合酶标仪测定其活力及含量水平。结果与对照组相比,40μmol/L HgCl_2可导致细胞活力降至0.52±0.03(P0.05),OA预处理可显著改善HgCl_2诱导的细胞活力降低,活力水平为0.86±0.05,较HgCl_2组显著升高(P0.05);线粒体膜电位检测结果显示细胞暴露于40μmol/L HgCl_2,红色荧光强度较对照组显著减弱,红绿荧光比值为0.23±0.02(P0.05),OA预处理可明显增加红色荧光,红绿荧光比值为1.32±0.08,较HgCl_2组显著增加(P0.05);细胞暴露于40μmo/L HgCl_2,其ROS相对荧光强度为1.21±0.07,细胞凋亡率可达8%左右,Casepase 3及Casepase 9的活力水平分别为3.11±0.20、2.94±0.17,均较对照组显著升高(P0.05),OA预处理可明显缓解上述指标的变化,与HgCl_2组相比,差异有统计学意义(P0.05);40μmo/L HgCl_2处理组,T-SOD水平为(7.68±0.39)U/mL,显著低于对照组(P0.05),MDA水平为(4.99±0.26)nmol/mg,较对照组显著升高(P0.05);OA预处理组,T-SOD水平为(13.97±0.71)U/mL,显著高于HgCl_2组(P0.05),MDA水平较HgCl_2组显著降低,为(3.01±0.17)nmol/mg(P0.05)。结论一定浓度HgCl_2可诱导肝细胞受损,OA预处理可能通过改善细胞的氧化应激状态减轻细胞损伤。