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生防菌Bs-916合成脂肽类化合物Bac操纵子突变株构建及功能

罗楚平  陈志谊  刘永锋  张杰  刘邮洲  王晓宇  聂亚锋  
【摘要】:生防枯草芽孢杆菌Bs-916对水稻纹枯病有很好的防治效果。【目的】明确其合成脂肽类化合物操纵子Bac功能,为遗传改良提高Bs-916防效奠定基础。【方法和结果】采用同源重组方法成功更换Bac内源启动子为组成性表达强启动子和插入失活Bac启动子,分别得到突变株BGG104和BGG105。突变株生物学活性测定结果表明:BGG104上清液相对Bs-916上清液对几种病原真菌毒力,血红细胞的溶血能力都显著提高;而BGG105则显著降低。采用6mol/L盐酸沉淀及甲醇抽提方法从Bs-916和突变株培养液中制备脂肽类化合物。反相HPLC结果表明Bs-916产生的脂肽类化合物与iturinA具有不同保留时间,BGG104培养液中脂肽类化合物量增加了3倍,BGG105培养液中未检测到脂肽类化合物峰。运用基质辅组解离质谱方法测得Bac合成的脂肽类化合物分子量分别为:1007.7Da、1021.7Da和1035.7Da;推测属于相差一个(—CH2)亚甲基同系物。【讨论】研究表明Bac编码多功能复合酶催化合成脂肽类化合物是Bs-916抗真菌活性关键因子,表达量提高可以增强其对多种病原真菌的毒力。

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