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血清质谱结合多反应监测方法应用于慢性乙肝肝纤维化分期相关小分子蛋白标志物的筛选

张清清  王美玲  贾晓芳  张丽军  王兴鹏  陆伦根  徐铭益  
【摘要】:目的通过血清蛋白组学方法,筛选慢性乙肝肝纤维化的血清诊断标志物。方法建立126例慢性乙肝患者的前瞻性临床队列,行肝活检确定组织纤维化程度(Scheuer病理学分期S0-S4)并留取血清标本。应用二维凝胶电泳(2-DE)分离20例轻度肝纤维化患者(S0-S1)和20例重度肝纤维化患者(S3-S4)血清蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白;质谱多反应(MRM)定量检测86例不同肝纤维化程度患者(S0-S4)的差异蛋白分子解离产生的肽离子对的峰面积总和比(SPAR)数值。结果 2-DE筛选出7个差异表达蛋白(质谱峰m/z800),由MRM定量检测它们解离的14个肽离子对。计算肽离子对的SPAR值,行组间统计学分析,仅差异蛋白1、4、8(血清转铁蛋白载脂蛋白,补体C3c和转铁蛋白)产生的离子对在S1-S4组比S0组的差异具有统计学意义(P0.05)。3个差异蛋白的肽离子对建立的诊断模型在区分显著肝纤维化S2-S4和轻度肝纤维化S0-S1时的受试者工作特征曲线下面积(AUROC)值范围是0.801~0.827。此方法建立的诊断模型在预测显著肝纤维化的诊断效力与APRI、FIB-4和Forn’s指数比较,具有相似的高敏感性和特异性。结论血清蛋白组学的质谱结合多反应监测方法筛选和验证血清小分子蛋白:血清转铁蛋白载脂蛋白、补体C3c和转铁蛋白可以初步诊断慢性乙肝患者的肝纤维化程度。

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