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重叠延伸PCR法在合成人骨保护素N端编码序列中的应用

王宝利  梁晖  戴芳  郭刚  张镜宇  
【摘要】:目的 :获得人骨保护素 (OPG)N端D1~D4结构域编码序列。方法 :OPGN端D1~D4域仅由2个外显子编码。采用改良方法自人血标本提取基因组DNA ,以此DNA作为模板 ,PCR分别扩增OPG基因外显子2和外显子3 ,并使外显子2的3'引物和外显子3的5'引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物的混合物作为模板 ,采用重叠延伸法再次进行PCR ,扩增产物克隆于载体pGEM -Teasy 进行序列分析。结果 :PCR扩增得到N端编码序列 ,序列分析证实该序列完全正确。结论 :重叠延伸PCR法合成人OPGN端编码序列的完成为基因工程研制有生物活性蛋白提供了可行的技术手段。

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