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熊果苷通过调控巨噬细胞TLR4/NF-κB通路抑制结核分枝杆菌活性的研究

李卫鸿  韩芸  师成玲  龙海青  邓晓珍  李明霖  张松达  
【摘要】:目的研究熊果苷通过调控巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路抑制结核分枝杆菌活性的机制。方法将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7分为对照组和熊果苷组,对照组正常培养,不干预;熊果苷组给予100μg/m L熊果苷干预24 h后,再用1 000 ng/m L脂多糖培养24 h。通过定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹法检测两组细胞TLR4和NF-κB表达的影响,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测熊果苷对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的影响。40只昆明雄性小鼠经尾静脉注射H37Rv结核分枝杆菌毒株建立结核菌感染小鼠模型,随机将其均分为4组:不进行任何治疗的结核组,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别接受腹腔注射10、25和50 mg/kg熊果苷治疗1次/周,共4周。结核感染模型建立4周后,处死小鼠,收集心脏外周血和肺组织,抗酸染色检测肺组织结核分枝杆菌数目; ELISA法检测小鼠外周血TNF-α、IL-1β和IL-6含量;流式细胞仪检测小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率和外周血CD68阳性细胞TLR4/NF-κB表达。结果与对照组相比,熊果苷组RAW264.7细胞TLR4和NF-κB表达显著增高,培养基中TNF-α、IL-1β和IL-6含量均显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。与结核组小鼠相比,经不同剂量熊果苷治疗(低剂量组、中剂量组和高剂量组)的结核杆菌感染的小鼠体重、外周血巨噬细胞TLR4/NF-κB表达水平以及外周血TNF-α、IL-1β和IL-6含量均显著增高,肺组织结核分枝杆菌数目和肺泡巨噬细胞凋亡率均显著降低,差异均有统计学意义(P 0.05),且以上指标均存在剂量依赖。结论熊果苷可以通过促进巨噬细胞TLR4/NF-κB通路的激活而促进巨噬细胞的存活和炎症因子的分泌,进而发挥抗结核的功能。

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