靶向大鼠Nogo受体基因的小发夹RNA慢病毒载体的构建及病毒包装

【摘要】：目的构建靶向大鼠Nogo受体(NgR)的小发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并进行病毒颗粒包装及滴度测定。方法设计合成3对针对大鼠NgR及1对非特异性的寡核苷酸单链,退火后得到shNgR双链,克隆入慢病毒载体pGC-LV,行聚合酶链反应(PCR)并测序鉴定重组体;构建NgR过表达载体,双酶切并测序鉴定插入序列正确性;NgR过表达载体和各慢病毒shRNA干扰载体共转染293T细胞后,定量反转录(RT)-PCR及蛋白印迹法筛选有效的慢病毒shRNA干扰载体;重组NgR慢病毒shRNA干扰载体和病毒包装质粒共转染293T细胞,包装并收集病毒颗粒,进行病毒浓缩液滴度检测。结果 PCR及DNA测序结果均显示慢病毒载体pGC-LV-shNgR构建正确;双酶切及测序亦显示NgR过表达载体插入序列正确;定量RT-PCR及蛋白印迹法结果表明所构建的3个慢病毒载体pGC-LV-shNgR均可以有效干扰NgR的表达,其中pGC-LV-shNgR-A干扰效率最高;包装病毒颗粒后,检测病毒浓缩液的滴度为2×107 TU/mL。结论成功构建靶向大鼠Nogo受体的shRNA慢病毒载体并进行病毒颗粒包装,浓缩的病毒液可以用于后续研究。

下载App查看全文

下载全文更多同类文献

PDF全文下载

CAJ全文下载

(如何获取全文？欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式

	【相似文献】
	【相似文献】

中国期刊全文数据库

前20条

1	袁涛;邓少丽;夏季;黄恒柳;;抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建[J];医学研究生学报;2008年06期
2	叶礼红;舒晓春;邬伟民;鲁红云;孟晓军;孙辽;;TIEG特异的siRNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医学杂志;2009年17期
3	刘飞;刘炳婷;白亮;杨公社;;猪Sirt2慢病毒干扰载体的构建[J];黑龙江畜牧兽医;2011年01期
4	王正辉;杨壮群;贺西京;李国光;王丽;李丽霞;屠军波;;大鼠Aggrecanse-1,2特异性shRNA慢病毒表达载体的构建及测序[J];中国美容医学;2007年12期
5	程海清;贾筱琴;李红;李玉华;朱进;管晓虹;冯振卿;;CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定[J];南京医科大学学报(自然科学版);2010年08期
6	窦立萍;达万明;王畅;康慧媛;赵瑜;孙敬芬;靳海杰;王全顺;高春记;于力;;Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J];中国实验血液学杂志;2008年03期
7	陈波;李建平;戴途;吴志勇;罗蒙;孙勇伟;;CRBP-1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J];南通大学学报(医学版);2007年06期
8	阮坚丽;高源;管文贤;乔志明;钱伟峰;;信号转录激活子3基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定[J];南通大学学报(医学版);2010年02期
9	崔万鹏;刘晓湘;方秀斌;;慢病毒载体介导的RNA干扰抑制PC12细胞MyD88基因的表达[J];解剖科学进展;2010年02期
10	肖兴鹏;田学愎;曹菲;陈益;高峰;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ基因小发卡RNA慢病毒载体的构建及其干扰效率的鉴定[J];医学研究生学报;2009年10期
11	崔勇;陈静;王君玉;王麒;胡国汉;骆纯;卢亦成;;AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];现代生物医学进展;2011年08期
12	钟河江;蒋建新;王海燕;杨策;张冲;严军;刘庆;黄苏娜;;小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选[J];现代生物医学进展;2009年08期
13	杨志峰;王龙;杨生生;匡颖;陈欢;徐国江;蔡在龙;王铸钢;毛积芳;;慢病毒载体介导IκB激酶-α(IKKα)基因RNA干扰转基因小鼠的制备[J];生物化学与生物物理进展;2007年02期
14	黄纯海;李学军;罗勇;黄军;袁贤瑞;;人EGFL7基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定[J];中华神经外科疾病研究杂志;2009年06期
15	陈东平;张志坚;吴秀丽;张彦定;;大鼠CXCR4基因RNAi慢病毒载体的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达[J];生物工程学报;2009年02期
16	于静;戚孟春;邓久鹏;刘刚;陈槐卿;;小鼠Smad6慢病毒干扰载体的构建及筛选[J];生物医学工程学杂志;2010年05期
17	刘莉;刘亚莉;马爽;赵越;安丽;于飞;任亚浩;杨军;;慢病毒载体介导的脂肪细胞SOCS-3RNA干扰及对瘦素反应的研究[J];生命科学研究;2010年05期
18	陈娴;谢渊;赵艳;周建奖;;shRNA表达载体的改建及鉴定[J];基础医学与临床;2011年01期
19	华敏敏;刘默芳;;ShRNA慢病毒表达载体的构建和病毒颗粒包装[J];中国细胞生物学学报;2010年04期
20	杨健;胡为民;任碧轩;唐恩洁;;RNA干扰体外抑制HBeAg的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期

中国重要会议论文全文数据库

前10条

1	张辉;于力;朱龙英;万延慧;朱为民;;Hair-pin RNA介导的番茄抗TYLCV效果初步研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
2	智深深;朱静;田杰;吕铁伟;鲁荣;邓兵;刘建平;林建萍;;小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其促进C3H10T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化的作用[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
3	孙新平;马春燕;张捷;崔彬;刘晓雯;辛玮;赵跃然;;人RAGE sh-RNA表达载体的构建及其对前列腺癌细胞RAGE基因表达的抑制作用[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年
4	卫秦芝;孟晓静;姚朗;张文娟;徐雷;;RNA干扰技术建立人支气管上皮细胞(16HBE)NF-κBp65缺陷模型[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
5	母连志;丁壮;丛彦龙;尹仁福;刘美;王昌庆;李少丽;邱蜜蜜;;靶向新城疫病毒P基因利用RNAi技术抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年
6	沈建军;刘家云;苏明权;缪应业;张青;郝晓柯;;应用RNAi技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
7	张慧;范列英;卢天宝;宗明;;RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
8	陈芸汪;亚平;胡炜;朱作言;;草鱼出血病病毒RNA干扰的抗病研究[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年
9	赵主江;单云峰;樊红;程欲超;成建;权艳梅;张建琼;谢维;;DNMT3A siRNA稳定表达载体的构建及其沉默效率的鉴定[A];江苏省遗传学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
10	吴云成;赵永波;刘文文;;短发夹RNA对多巴胺能细胞株外源绿色荧光蛋白基因表达的影响[A];2005年中国神经心理学学术会议论文集[C];2005年

中国博士学位论文全文数据库

前10条

1	杨志峰;应用慢病毒载体介导RNA干扰在MCF-7细胞中剔降IKKα基因和制备转基因小鼠模型的研究[D];第二军医大学;2006年
2	刘瑜;BTBD10在人脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞株增殖和凋亡的影响[D];第二军医大学;2010年
3	吕碧涛;慢病毒介导RNA干扰NgR基因对脊髓损伤的修复作用[D];第二军医大学;2007年
4	徐盛明;大鼠脊髓横断后应用慢病毒介导SiNgR-199的疗效分析[D];第二军医大学;2007年
5	韦烨;基因改造骨髓造血干细胞靶向抑制结直肠癌新生血管形成的实验研究[D];复旦大学;2010年
6	罗远材;PKR/EIF2α信号传导通路与宫颈癌关系研究[D];天津医科大学;2010年
7	俞晓岚;过表达CXCR4的骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑梗死的疗效观察[D];福建医科大学;2010年
8	吕学军;Caveolin-1在LPS诱导AT-1细胞和小鼠肺部急性损伤中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2010年
9	王鹏雁;口蹄疫病毒干扰RNA转基因小鼠模型的构建[D];石河子大学;2008年
10	贺云霞;应用RNAi技术抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的研究[D];中国农业科学院;2006年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	黄智勇;骨桥蛋白特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及其在U251胶质瘤细胞中沉默效应的鉴定[D];福建医科大学;2009年
2	赵颖杰;慢病毒介导的RNA干扰靶向TNF-α治疗小鼠胶原诱导性关节炎的研究[D];青岛大学;2009年
3	盛鹏程;绵羊Myostatin基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定[D];山东农业大学;2011年
4	潘琳;RNA干扰靶向TNF基因治疗类风湿关节炎实验研究[D];青岛大学;2007年
5	陈豪;乙肝病毒X基因（HBVX）慢病毒载体的构建和鉴定[D];福建医科大学;2011年
6	周星娟;大鼠RAG1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定[D];浙江大学;2008年
7	沈上杭;短发夹RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及转移的影响[D];福建医科大学;2010年
8	魏衍全;慢病毒介导shRNA稳定持续抑制口蹄疫病毒增殖的两类细胞系的建立[D];中国农业科学院;2011年
9	陈鹏;靶向SMAD3基因的siRNA筛选及其慢病毒载体的构建[D];泸州医学院;2010年
10	张国峰;慢病毒载体介导的RNAi抑制牛整联蛋白亚基αv基因表达的研究[D];中国农业科学院;2011年

中国重要报纸全文数据库

前10条

1	徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
2	张中桥;第四军医大学西京医院实现肿瘤特异性RNA干扰[N];中国医药报;2006年
3	颜莘;国产转基因抗虫棉打破国外垄断[N];中国知识产权报;2007年
4	余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
5	李彬;今年技术发展呈八大趋势[N];科技日报;2005年
6	记者吴伟农;世界十大科技突破[N];新华每日电讯;2001年
7	本报记者韦绍锋邢少文康义文康义瑶（实习）驻地记者胡勇;生物医药“海归”之惑[N];医药经济报;2004年
8	张中桥;四医大西京医院发现 FAS启动子具有肿瘤靶向性[N];中国医药报;2007年
9	双华斌;爱,竟让我们如此感动[N];中国教育报;2008年
10	朱恒顺;山大一项免疫学成果通过鉴定[N];科技日报;2002年

	快捷付款方式		订购知网充值卡	订购热线	帮助中心
	微信支付支付宝银行卡	知网卡在线购卡更多>>	免费送卡上门银行汇款购卡邮局汇款购卡	400-819-9993 010-62982499 010-62783978	常见问题在线咨询阅读器下载	充值中心知网卡新手指南