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腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立

高雅丽  张勇侠  陈宗香  康庄  罗心梅  丛聪  李立  刘兰军  
【摘要】:目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1~R。方法将JL1全长c DNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,Hdv RZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUV_(JL1)(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1~R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1~R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1~R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lg CCID_(50)/mL以上;JL1~R与疫苗株S_(79)诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1~R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S_(79)疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。

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