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犬干扰素α1基因的修饰及在毕赤酵母中的表达

王玉  朱艳平  郭霄峰  
【摘要】:目的修饰犬干扰素α1(Canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,提高其在毕赤酵母中的表达水平及抗病毒活性。方法根据巴斯德毕赤酵母表达系统对密码子的偏爱性,将CaIFNα1基因改造后,克隆至分泌表达载体pPICZαC中,电转化巴斯德毕赤酵母X33,甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定和氨基酸测序后,检测重组蛋白的表达量及抗水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性。结果重组表达质粒pPICZαC-CaIFNα1经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组CaIFNα1蛋白相对分子质量约为24 000,蛋白氨基酸序列与天然的CaIFNα1氨基酸序列相同,3批重组酵母菌表达产物的蛋白含量分别为0.253、0.198和0.224 mg/ml,在Vero细胞上均无抗VSV活性,在MDCK细胞上的抗VSV活性分别为1.58×108、1.30×108和1.50×108 U/mg。结论 已成功改造了CaIFNα1基因,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为大量发酵生产干扰素奠定了基础。

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